由重组腺相关病毒1/2载体携带的LacZ报告基因在脐血间质干细胞中的表达

• 作者: 单根法 钟竑 陈德海 马南
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 间质干细胞 胎血/细胞学 腺病毒科 基因 转染
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 408-411,后插页1
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 6585字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.03.004

摘要

目的:观察由重组腺相关病毒1/2载体携带的LacZ报告基因在体外培养的脐血间质干细胞中的表达情况.方法:实验于2005-10/2006-02在上海交通大学附属新华医院科研中心完成.①以孕龄近60 d的杂种妊娠犬的脐带血作为实验用脐血间质干细胞的标本来源.重组腺相关病毒1/2载体-lacZ基因(北京本原正阳基因技术有限公司).②无菌条件下采集妊娠犬脐带血,置于预装有肝素的离心管中,与Hanks液1∶1混合均匀,叠加于相对密度为1.077的淋巴细胞分离液上,梯度离心分离后进行培养和扩增.③取第4代脐血间质干细胞,经胰酶消化后吹打成单细胞悬液,以5×104/孔接种于24孔板内,随机数字表法分为转染组20孔、空白对照组4孔.转染组将重组腺相关病毒1/2载体-lacZ报告基因(1×1012v.g.mL-1)用不含血清的IMDM培养液作系列滴度稀释,分为5个滴度,即感染复数分别为每个细胞1×102,1×103,1×104,1×105,1×106v.g,各感染复数均设4孔;空白对照组未加入病毒,只加入相同体积的不含血清的IMDM培养液.④转染72 h后采用X-gal化学染色法进行检测,成功转染上LacZ基因的脐血间质干细胞其胞浆内会因合成半乳糖苷酶而呈阳性蓝染.每组样本随机选取5个视野,相差显微镜下计数半乳糖苷酶阳性细胞数,取均值即为LacZ基因细胞转染率.结果:①脐血间质干细胞生长情况及LacZ报告基因表达的检测:转染组病毒基因转染后未再见到明显的细胞增殖,转染72 h后大部分细胞表达LacZ基因并合成半乳糖苷酶,X-gal染色呈蓝色,长梭形;4～6周后细胞形态趋向老化,长梭形逐渐变为宽扁形;8周后细胞均被蓝染,颜色明显较转染72 h时深,细胞形态由长梭形变为不规则,明显老化.空白对照组细胞反应均为阴性.②LacZ报告基因细胞转染率测定结果:转染72 h后,感染复数为每个细胞1×102v.g时,仅有少数细胞蓝染呈阳性;感染复数为每个细胞1×103,1×104,1×105,1×106 v.g时,转染率分别为(43±5)%,(82±4)%,(95±4)%,(97±3)%.结论:体外培养的脐血间质干细胞能高效转染重组腺相关病毒1/2载体-lacZ报告基因,在一定感染复数范围内,细胞转染率随着感染复数的增加而升高.提示脐血间质干细胞是重组腺相关病毒1/2载体-lacZ报告基因转染的适宜靶细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单根法	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	18	46	4.0	6.0
2	钟竑	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	39	154	8.0	10.0
3	马南	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	57	78	4.0	7.0
4	陈德海	上海交通大学医学院附属新华医院胸心外科	7	14	3.0	3.0