大鼠内皮祖细胞的分离培养与鉴定

• 作者: 余荣杰 刘宏 吴雄飞 干磊 曾玲 李敛 赵洪雯
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 内皮祖细胞 分离 培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2007,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1836-1839,封2
• 页数: 5页
• 分类号: R365|Q25
• 字数: 3810字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2007.18.021

摘要

目的 研究大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的分离培养和鉴定方法.方法 纤维连接蛋白提前包被培养瓶和培养板中的盖玻片.密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,EGM-2完全培养基,贴壁法,37℃, 5%CO2,饱和湿度的恒温培养箱中原代培养.部分培养瓶细胞消化后计数.其余培养瓶和培养板中盖玻片细胞继续培养,细胞近融合时传代,分别在第6、9、12和24天进行细胞鉴定.内皮祖细胞鉴定:免疫细胞化学的vWF和VEGFR-2染色;内吞DiI标记的乙酰低密度脂蛋白(DiI-AcLDL)和结合FITC标记的荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的激光共聚焦显微镜观察.结果 培养细胞的形态学改变:骨髓单个核细胞种植24h后部分细胞开始贴壁、变大,倒置显微镜下贴壁细胞透亮度增强,并逐渐伸出伪足样突起,呈小杆状或梭形.培养第3天贴壁细胞开始增殖,呈"集落"样生长,外周梭形细胞较多.第6天梭形细胞显著增多,培养至第12天左右,梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管"样排列.培养第6天的细胞数量级为106～107/瓶.内皮祖细胞的鉴定:激光共聚焦显微镜观察显示细胞DiI-acLDL和FITC-UEA呈红绿免疫双荧光阳性.培养第6天细胞VEGFR-2和vWF免疫细胞化学染色呈阳性.结论 大鼠的骨髓单个核细胞可以培养为内皮祖细胞,且数量级达到106～107,可以满足动物实验研究的需要.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵洪雯	第三军医大学西南医院肾科	84	528	13.0	18.0
2	干磊	第三军医大学西南医院肾科	26	138	7.0	11.0
3	余荣杰	第三军医大学西南医院肾科	63	341	10.0	15.0
4	吴雄飞	第三军医大学西南医院肾科	165	855	16.0	22.0
5	刘宏	第三军医大学西南医院肾科	81	282	8.0	13.0
6	李敛	第三军医大学西南医院肾科	38	210	8.0	12.0
7	曾玲	第三军医大学西南医院骨科	7	36	4.0	6.0