体外原代培养成年大鼠许旺细胞的实验方法:组织块反复种植+低浓度酶消化+差速贴壁

• 作者: 万涛 刘婷 李世普 袁琳
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 雪旺细胞 细胞培养 纯化 组织工程
• 年，卷（期）: 2007,（28）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 5545-5547
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 4095字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.28.027

摘要

目的:探讨获得高纯度成年SD大鼠许旺细胞的有效方法.方法:实验于2006-12在武汉理工大学完成.①许旺细胞原代培养:无菌条件下暴露SD大鼠左侧坐骨神经,切断神经,结扎后缝合臀大肌及皮肤.7 d后处死大鼠,切取左侧预变性坐骨神经,并取右侧正常坐骨神经做对照,显微镜下尽量去除神经外膜及黏连组织,将神经剪成1 mm3的组织块,植入培养瓶中进行培养,组织块间距以1 cm为宜.②许旺细胞传代及纯化:培养7 d后,将组织转移到新的培养板中继续培养,继之依次应用低浓度酶消化法、差速贴壁分离法去除成纤维细胞,纯化许旺细胞.③许旺细胞的观察和计数:在倒置相差显微镜下观察许旺细胞的形态和增殖情况,定期随机采集细胞图像,并用MTT法测试其增殖能力.④许旺细胞的鉴定:对纯化的许旺细胞进行S-100蛋白酶联免疫细胞化学染色鉴定.结果:①许旺细胞的分离培养和纯化:预变性组许旺细胞密度高于正常对照组,培养7 d后两组的密度差别尤为显著.②许旺细胞的形态学观察:许旺细胞为典型的长梭状,具有双极或多级,两端突起较长,汇合成片并交织呈网状.正常对照组细胞密度较低,生长较慢,胞体较长,细胞多呈三角形或多角形.MTT生长曲线显示:预变性组许旺细胞倍增时间为3 d,正常为4 d.③许旺细胞的免疫化学鉴定:许旺细胞胞体及突起呈棕褐色,而成纤维细胞为扁平状且未着色,呈透明状.预变性组许旺细胞纯度为95%,正常对照组为86%.结论:本实验所采用的组织块反复种植+低浓度酶消化+差速贴壁法分离纯化许旺细胞切实可行,可有效获得大量高纯度许旺细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁琳	武汉理工大学生物材料与工程研究中心	21	188	8.0	13.0
2	李世普	武汉理工大学生物材料与工程研究中心	188	2142	24.0	37.0
3	万涛	武汉理工大学生物材料与工程研究中心	53	577	14.0	21.0
4	刘婷	武汉理工大学生物材料与工程研究中心	16	44	5.0	6.0