可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox的构建与表达

• 作者: 李俊刚 王宇明 陈耀凯
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 永生化 载体 基因 回复
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 437-441
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.04.015

摘要

目的 探讨以hTERT作为永生化基因、嘌呤霉素乙酰转移酶基因puro作为筛选基因、加强型绿色荧光蛋白EGFP作为报道基因、loxP作为重组位点构建可回复性永生化逆转录病毒载体,为建立可回复性永生化细胞株奠定基础.方法 用NheⅠ酶切线性化pBABE-puro产生两个相同的黏端,与loxP双链混合连接构建成载体pBABE-puro-lox;用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切下逆转录病毒载体pBABE-hTERT-puro上约3.5kbhTERT基因片段,插入pBABE-puro-lox载体的相应酶切位点之间,重组的新载体称为phTERTPlox;扩增出无终止密码子的EGFP基因片段并插入phTERTPlox,正确构建的载体命名为phTERTGPlox.转染包装细胞PT67并用嘌呤霉素选择培养,在荧光显微镜下观察绿色荧光细胞,免疫组化染色检测hTERT基因的表达.结果 EcoRⅠ和NheⅠ双酶切鉴定phTERTGPlox形成4.0kb和5.3kb两个片段,转染PT67细胞荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光细胞,免疫组化染色结果显示稳定转染的细胞胞核呈阳性染色.结论 成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈耀凯	第三军医大学西南医院全军感染病研究所	48	477	11.0	20.0
2	王宇明	第三军医大学西南医院全军感染病研究所	299	2460	25.0	35.0
3	李俊刚	第三军医大学西南医院全军感染病研究所	17	85	5.0	8.0