冲击波通过ATP释放、P2受体及激活p38MAPK激酶促进T细胞增殖和分泌白细胞介素2

• 作者: 于铁成 刘建国 赵毅 金安 陈玮伦
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 促分裂原活化蛋白激酶p38 白细胞介素2 T细胞增殖 ATP
• 年，卷（期）: 2007,（31）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6305-6310
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 2233字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.31.033

摘要

背景:以往研究发现,冲击波可通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38(p38MAPK),增强CD3和CD28激活的T细胞增殖和分泌白细胞介素2.目的:观察细胞内的ATP向外释放,是否为冲击波增强T细胞功能的潜在机制.设计:以细胞为观察对象,分组对照重复测量观察.单位:吉林大学第一医院骨科研究室.材料:KDE-2001体外冲击波碎石机(北京中科建安医疗技术公司制造).MAPKp38抑制剂:SB203580 1 mg(BioSource Inc.,Camarillo,CA);检测磷酸化的p38MAPK试剂盒(Cell Signaling Tehchmology,Inc.U.S.A.);P2受体抑制剂:suramin 50 mg(BIOMOL Research Laboratories Inc,PA),用1.749 2 mL的IMDM培养基将50 mg的suramin配成0.02 mol/L的溶液.ATP酶:apyrase 200 U(Sigma,U.S.A.);P2X7受体阻滞剂:KN-62(BioSource Inc.,Camarillo,CA);p38 MAPK抑制剂:SB203580 1 mg(BioSource Inc.,USA*542 Flynn Roas,Camarillo,CA);检测ATP的生物荧光试剂盒/ATP Bioluminescence Assay Kit CLS Ⅱ(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany).方法:实验于2005-01/2006-12在吉林大学第一医院骨科研究室完成.①采用体外冲击波碎石机(工作电压7 kV、电容0.3μF时,冲击波正相压强23 MPa,能量密度0.18 mJ/mm2)作用于T细胞,冲击波作用50～400次.②用特异性的ATP试剂盒检测低能冲击波是否引起T细胞(人外周血单个核细胞和Jurkat T细胞)分泌ATP.③设无拮抗剂和抑制剂的阴性对照组.用人外周血单个核细胞检测低能冲击波对激活的T淋巴细胞增殖的影响,用Jurkat细胞检测低能冲击波对T淋巴细胞分泌白细胞介素2的影响,用抗-p38 MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗体通过免疫印迹法测定Jurkat T细胞上的p38 MAPK的表达及磷酸化.主要观察指标:T细胞外的ATP含量、细胞悬液中的白细胞介素2的含量、细胞的增殖和细胞p38MAPK的磷酸化程度.结果:①冲击波作用100,150,200,250,300,360和400次时较无冲击波作用时细胞外的ATP的含量明显增加(P＜0.01),并且ATP的增加含量和冲击波的作用次数有依从关系.②加入apyrase,KN-62,suramin的植物血凝素激活的外周血单个核细胞细胞或CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在能量密度为0.18 mJ/mm2的冲击波作用100,150,200,250,300,330次时,细胞对3H-TdR掺入量比没有加入apyrase、KN-62或suramin的阴性对照组低(P＜0.01),细胞上清液中的的细胞介素-2的活性含量表现为明显增高(P＜0.01).加入ATP、KN-62或suramin后,冲击波激活Jurkat T细胞的p38 MAPK的程度明显降低.结论:①低能冲击波能损伤细胞膜而不损伤其他细胞器,引起T淋巴细胞内的ATP过多向细胞外分泌,细胞外过量的ATP过多地激活了P2X7受体,激活细胞内的大量的p38 MAPK,最后磷酸化的p38MAPK作为协同刺激因子增强激活的T淋巴细胞增殖及分泌白细胞介素2.②在低能冲击波对T淋巴细胞的功能调节上,T细胞分泌的ATP起到非常重要的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建国	吉林大学第一医院骨科	141	997	15.0	24.0
2	赵毅	吉林大学第一医院骨科	41	219	8.0	13.0
3	于铁成	吉林大学第一医院骨科	27	110	6.0	9.0
4	金安	吉林大学第一医院骨科	17	64	4.0	7.0
5	陈玮伦	吉林大学第一医院耳鼻喉科	11	9	2.0	2.0