人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定

• 作者: 卞智萍 季鹏 张寄南 杨笛 陈相健 顾春荣
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 载体蛋白质类 人 分离和提纯 组织构建
• 年，卷（期）: 2007,（27）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5387-5390
• 页数: 4页
• 分类号: R341
• 字数: 4620字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.27.034

摘要

目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法.方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成.①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供.②实验过程:取20 g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白.③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性.结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14 400的人心脏型脂肪酸结合蛋白.②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6 mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20 mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束.③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14 000,纯度约为90%;Westem印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致.实验从20 g湿重心室肌中共纯化得到15.4 mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77 mg/g.结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨笛	南京医科大学第一附属医院心血管病研究所	55	291	8.0	14.0
2	张寄南	南京医科大学第一附属医院心血管病研究所	85	506	11.0	19.0
3	卞智萍	南京医科大学第一附属医院心血管病研究所	18	87	5.0	8.0
4	顾春荣	南京医科大学第一附属医院心血管病研究所	9	15	3.0	3.0
5	陈相健	南京医科大学第一附属医院心血管病研究所	27	192	7.0	13.0
6	季鹏	南京医科大学第一附属医院心血管病研究所	3	34	2.0	3.0