反转录病毒载体介导RNA干扰抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达

• 作者: 吴丹 李珊珊 索振河
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: EphA2 反转录病毒载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2007,（37）
• 所属期刊栏目: 细胞转载及转染技术
• 页码范围: 7401-7404
• 页数: 4页
• 分类号: R730
• 字数: 3673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.37.025

摘要

目的:课题前期发现EphA2和配体EphrinAl在宫颈鳞癌细胞和肿瘤相关血管内皮细胞均呈高表达,为基因治疗宫颈癌提供了理想的靶向.以此为基础,利用反转录病毒载体介导的RNA干扰抑制EphA2在Hela宫颈癌细胞中的蛋白表达.方法:实验于2006-01/06在河南省肿瘤病理重点实验室完成.①实验材料:PA317细胞、Hela229细胞购自上海生化细胞所,小鼠NIH3T3细胞为本室保存.EphA2兔抗人多克隆抗体,Actin兔抗人多克隆抗体(美国Santa Cruz公司).②实验方法:从EphA2的mRNA全序列中筛选出1个19 nt的靶序列,设计双链发夹结构.以siRNA互补双链寡核苷酸,构建反转录病毒表达载体pSIREN-EphA2,提取质粒,用BgIⅡ和EcoR Ⅰ双酶切进行鉴定.选择经酶切鉴定的正确克隆测序.挑选pSIREN-EphA2抗性克隆细胞扩增,检测转染后Hela细胞中EphA2蛋白的表达水平.结果:①pSIREN-EphA2重组质粒的酶切鉴定:双酶切后形成328 bp和6 182 bp两条电泳条带.②pSIREN-EphA2重组质粒测序:结果与已知序列完全一致.③EphA2蛋白的表达:经Western blot分析,重组pSIREN-EphA2转染的Hela细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低.结论:通过反转录病毒载体介导的RNA干扰,能够抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达,为以EphA2为靶点的宫颈癌基因治疗提供新的思路和手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李珊珊	郑州大学第一附属医院病理科	52	152	7.0	9.0
2	吴丹		44	397	12.0	18.0