应用载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞H-rasVal12的表达

• 作者: 冯增利 孟繁杰 尹东剑 曹斌 王海刚 赵文增 马顺茂
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: RNA干扰 肝肿瘤 短发夹RNA 基因,抑制
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1000-1003
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2013.03.088

摘要

目的 观察载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对肝癌细胞突变的H-rasVal12表达的抑制作用.方法 将针对突变H-ras的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体转染肝癌细胞株BEL7402和SMMC7721,用免疫印迹(Western blot)法检测H-ras蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.计量资料比较采用t检验;计数资料比较采用χ2检验.结果 (1)转染前、后SMMC7721的H-ras蛋白表达量[光密度值分别(1 752±21)和(1 736±28)]比较,差异无统计学意义(t=0.474,P=0.646);而转染了H1-shRNA的BEL7402的H-ras蛋白表达量(920±11)与转染前(1 221±11)比较,差异有统计学意义(t=20.126,P＜0.01);转染了H2-shRNA的BEL7402的H-ras蛋白表达量(872±10)与转染前(1 201±10)比较,差异有统计学意义(t=23.477,P＜0.01).H1-shRNA组和H2-shRNA组H-ras蛋白表达下调了62.8%和63.4%.(2)流式细胞仪检测表明,BEL7402转染H1-shRNA质粒后细胞凋亡率(47.7%)与转染H2-RNA质粒后细胞凋亡率(49.3%)比较,差异无统计学意义(χ2=0.005,P=0.94);但均高于BEL7402转染对照质粒后细胞凋亡率(30.2%),差异有统计学意义(χ2H1=6.810,P＜0.01;χ2H2=6.103,P＜0.01).结论 载体介导的RNAi技术可有效特异抑制肝癌细胞突变的H-rasVal12表达,对野生型的H-ras表达无影响.