70 mer长寡核苷酸探针芯片制备、标记方法及杂交条件的优化

• 作者: 庞靖祥 潘继红 韩金祥 高雪芹
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 寡核苷酸探针 基因芯片 条件优化
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: Q81
• 字数: 4243字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.01.003

摘要

目的 优化长片段寡核苷酸芯片制备、探针标记及杂交条件.方法 通过直接标记方法优化芯片的点样浓度、点样后的固定方法.探索两种靶基因标记方法,并优化杂交液及各种杂交条件.结果 采用70 mer寡核苷酸探针,点样浓度在10 μmol/L时就可获得满意的荧光强度.探针点样后37 ℃水合,然后在3 600 mJ条件下进行紫外交联固定效果最好.样品采用生物素间接标记较CY3直接标记信号强度强,成本相对低廉.优化出的杂交液成分:50 %甲酰胺、5×SSC、0.5 %SDS,杂交时间为8 h,杂交温度为65 ℃.结论 通过此试验优化了制备病原体长探针寡核苷酸芯片的制备方法,样品标记策略和杂交液及杂交温度,为下一步制备多种病原体的寡核苷酸芯片检测系统奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高雪芹	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室	37	160	6.0	10.0
2	韩金祥	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室	212	1027	15.0	22.0
3	庞靖祥	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室	14	51	4.0	6.0
4	潘继红	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室	22	157	8.0	11.0