fliR基因与问号钩端螺旋体黏附及损伤细胞功能相关性的研究

• 作者: 严杰 孙爱华 李世军 王欣莹 阮萍
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体,问号/致病力 基因表达 细胞凋亡 Ⅲ型分泌系统 fliR基因 黏附 坏死
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 572-578
• 页数: 7页
• 分类号: R377.5
• 字数: 4431字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2008.06.006

摘要

目的:了解问号钩端螺旋体(简称钩体)fliR基因的致病性.方法:分别从问号钩体黄疸出血群56601株DNA和pET42a质粒中扩增fliR基因和kana基因.构建fliR基因自杀质粒,并设计和合成特异性siRNA.采用分别基于自杀质粒的基因敲除、基于siRNA的基因沉默技术构建问号钩体fliR基因突变株,并用PCR、测序、半定量RT-PCR进行鉴定.采用小鼠单核-巨噬细胞J774A.1黏附试验和流式细胞术,检测敲除fliR基因的问号钩体突变株56601fliR-Kana、siRNA阻断fliR基因的问号钩体突变株56601siRNA-R2株黏附细胞,及诱导细胞坏死或凋亡能力的变化.结果:所克隆的fliR基因与GenBank中相应基因的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%和100%,所克隆的kana基因核苷酸序列与pET42a图谱完全相同.56601fliR-Kana可在含氨苄青霉素和卡那霉素的EMJH培养基中生长,PCR和测序结果证实56601fliR-Kana株fliR基因中插入了kana基因.56601fliR-Kana株fliR基因mRNA水平明显下降(P<0.01),56601siRNA-R2株fliR基因mRNA水平也低于野生株(P<0.05).56601fliR-Kana和56601siRNA-R2黏附J774A.1细胞的能力基本消失,诱导J774A.1细胞坏死或凋亡的能力也明显减弱(P<0.01).结论:fliR基因是问号钩体毒力相关基因,其功能与问号钩体黏附细胞、诱导细胞凋亡或坏死密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮萍	绍兴文理学院医学院	24	101	6.0	9.0
3	孙爱华		112	523	11.0	15.0
4	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
7	王欣莹		4	19	1.0	4.0
8	李世军	浙江大学医学院病原生物学系	2	5	1.0	2.0