基孔肯雅病毒中和表位的筛选及表达

• 作者: 侯利华 安小平 徐俊杰 李冰 李博 李建民 童贻刚 陈薇
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 基孔肯雅病毒 中和抗体 噬菌体展示肽库 中和表位
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 424-427
• 页数: 4页
• 分类号: R373
• 字数: 4510字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.05.007

摘要

目的:寻找基孔肯雅病毒中和表位,并将其表达为重组融合蛋白.方法:对噬菌体展示12肽库进行了生物淘洗,随机挑取噬菌体克隆,使用 ELISA方法筛选并鉴定阳性克隆,分析阳性克隆的DNA序列,将其翻译成氨基酸序列进行同源性比较.将其中一个表位连同M13噬菌体PⅢ蛋白结构域Ⅰ～Ⅱ的编码序列用PCR技术扩增后插入原核表达载体pQE30,用IPTG诱导融合蛋白表达.结果与结论:从经过3轮淘洗的噬菌体中随机挑选123个克隆,从中筛选到20个阳性克隆,其中包含7种不同的氨基酸序列,这些序列缺乏同源性,表明该单抗表位应为构象型表位.在室温培养条件下成功地在大肠杆菌周质腔表达了一种可溶性的表位融合蛋白,经亲和层析得到了纯化的表位融合蛋白.