禽流感病毒H5N2亚型A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

• 作者: 兰喜 方玉萍 李学瑞 李宝玉 杨斌 柳纪省 殷相平
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽流感病毒 HA+NA基因 重组腺病毒 同源重组
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 205-209
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3344字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.03.005

摘要

目的 基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性,本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒,为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础.方法 通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段,利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中,然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组,获得插有外源基因的重组腺病毒质粒,进而通过转染HEK293细胞,得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒.结果 在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达.结论 成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒,为口服活载体疫苗的研制提供了依据.