人共刺激分子4-1BBL表达载体的构建及转染Tca8113细胞的研究

• 作者: 储眉 孙顺涛 张立兵 张键荣 杨宏宇 桂耀庭 罗娟
• 来源期刊: 中国口腔颌面外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Tca8113 4-1BBL 共刺激分子 质粒构建 基因转染
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 188-193
• 页数: 6页
• 分类号: R739.8
• 字数: 4397字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3244.2008.03.007

摘要

目的:克隆人肿瘤坏死因子配体超家族(tumor necrosis factor superfamily,TNFSF)成员4-1BBL基因,构建其真核表达载体,并检测4-1BBL基凶在Tea8113中的表达.方法:从淋巴细胞中提取RNA.用RT-PCR方法将4-1BBL的编码序列cDNA扩增.然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP-Cl质粒中.构建成最终的表达载体pEGFP-Cl-4-1BBL.运用脂质体方法将pEGFP-Cl-4-1BBL转染Tea8113细胞.转染24h后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR和免疫印迹检测4-1BBL在该细胞中的表达.经G418筛选后.用有限稀释法建立稳定高表达的带有4-1BBL基因的Tca8113细胞系.结果:从淋巴细胞中提取的RNA经RT-PCR扩增出目的基因4-1BBL,其全长大小为768bp.测序鉴定该序列与GenBank中的序列丰廿同.转染pEGFP-Cl-4-1BBL载体的靶细胞Tca8113中,荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白,RT-PCR方法检测到目的基因4-1BBL的768bp大小的cDNA扩增产物.裂解的4-1BBL/Tea8113基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约27.5Kd的特异性条带.结论:转染4-1BBL基因细胞株的建立,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙顺涛	北京大学深圳医院口腔颌面外科	6	14	3.0	3.0
3	杨宏宇	北京大学深圳医院口腔颌面外科	72	187	7.0	10.0
4	桂耀庭	北京大学深圳医院口腔颌面外科	78	236	9.0	11.0
5	罗娟	北京大学深圳医院口腔颌面外科	29	154	7.0	11.0
6	张立兵	北京大学深圳医院口腔颌面外科	7	35	3.0	5.0
7	张键荣	北京大学深圳医院口腔颌面外科	6	15	3.0	3.0
8	储眉	北京大学深圳医院口腔颌面外科	3	12	3.0	3.0