鸡破骨细胞分化因子(chRANKL)的克隆、表达和活性分析

• 作者: 侯加法 姚静 张风荣 王艳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡破骨细胞分化因子(chRANKL) 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 32-36
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3964字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.01.006

摘要

以鸡(Gallus domesticus)成骨细胞总RNA为模板,利用RT-PCR和SOE-PCR技术体外扩增鸡破骨细胞分化因子(RANKL)基因,将PCR产物克隆至组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-32a(+),在异丙基-?D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下,实现了chRANKL的有效表达,表达产物纯化后稀释成不同浓度梯度作用成熟破骨细胞观察其生物学活性.结果表明,凝胶电泳显示PCR扩增产物的长度为1 200 bp左右,插入片段与GenBank上报道的鸡RANKL序列完全一致.重组表达载体转化BL21后经IPTG诱导获得大小约为64 kD的重组蛋白,Western印迹表明重组蛋白能与抗组氨酸抗体相结合,具有特异反应性;并且纯化后的蛋白能刺激成熟破骨细胞,使骨吸收指数呈剂量依赖性增加,表明具有一定的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯加法	南京农业大学动物医学院	144	1082	17.0	25.0
2	王艳	南京农业大学动物医学院	27	496	10.0	22.0
3	张风荣	南京农业大学动物医学院	5	8	2.0	2.0
4	姚静	南京农业大学动物医学院	17	109	6.0	10.0