利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1

• 作者: 姚彤炜 曾苏 路珂
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 杆状病毒科 细胞色素P450酶系统 蛾/细胞学 大肠杆菌/遗传学 重组,遗传 细胞色素P450 杆状病毒 草地夜蛾细胞 氯唑沙宗
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 118-125
• 页数: 8页
• 分类号: R965.1
• 字数: 5640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2008.02.003

摘要

目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究.方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过转座作用,获得重组Bacmid-CYP2E1,将其转染草地夜蛾细胞(Sf9) 后,产生重组杆状病毒.将该病毒以及分别含有人CYPOR和人CYPb5的病毒共同感染Sf9细胞,收集共表达蛋白,以氯唑沙宗为底物鉴定重组酶的活性.结果:利用细菌/杆状病毒系统得到重组人CYP2E1的表达,其对氯唑沙宗的Km值为(72.4±8.7)μmol·L-1,Vmax值为(2.41±0.10)μmol·min-11·g-1蛋白.结论:利用杆状病毒系统成功表达了有催化活性的人CYP2E1重组酶,其活性与文献报道值相似.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚彤炜	浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室	90	765	15.0	22.0
2	曾苏	浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室	162	1373	22.0	31.0
3	路珂	浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室	1	10	1.0	1.0