pICln蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

• 作者: 张蒙 李俐 李晓梅 郗艳丽 马颖哲
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: pICln 合成肽 单克隆抗体 Westem blot
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 640-643
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4168字
• 语种: 中文

摘要

目的:制备特异性的抗plCln蛋白的单克隆抗体(McAb),为plCln的纯化及检测等提供必要的工具.方法:以pICln的合成肽为免疫原,对BALB/c小鼠注射免疫,将免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,用显微镜下挑选单个克隆的克隆化方法克隆化,用间接ELISA检测法进行筛选.单抗的效价、亚型及特异性用ELISA、免疫双向扩散实验和Western blot等检测.结果:获得了稳定的分泌型杂交瘤细胞株大2B7和4A3,2B7培养上清液单抗效价为1:64,属IgGl亚型,其腹水抗体效价及纯化抗体的效价分别为1:1.28×104、1:6.4×103,Westem blot及免疫耗竭实验呈现一条约40 kD)的特异性带,免疫组织化学染色显示在细胞核和细胞质中呈现阳性反应.结论:本次制备的单抗具有特异性、高效价,可应用于plCln蛋白的纯化及检测等研究.