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摘要:
目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系.方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型(野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并通过共转染方式导入目的基因.细胞凋亡的处理条件:细胞在无葡萄糖缓冲液的培养基中,在含10 mmol·L-1叠氮钠或1μmol·L-1十字孢碱(STS)或20 p.mol·L-1顺铂条件下培养,并诱导细胞凋亡.应用共聚焦显微镜和免疫荧光及免疫印记技术分析细胞凋亡、线粒体碎裂和细胞色素C释放情况,综合评价Bak基因在细胞凋亡和线粒体碎裂中的作用.结果:Hela细胞内线粒体碎裂和细胞色素C释放百分率分别与细胞凋亡有关联(P<0.01);MEF细胞在Bak基因缺失(Bak-/-)时,应用化学诱导剂导致的细胞凋亡率(17.9%)明显低于野生型MEF细胞(71.3%)(P<0.01);且Bax和Bak基因两者协同作用可以增强细胞凋亡发生率;当pEGFP-Bak重新导入PBx-/-/Bak-/-MEF细胞,线粒体破碎百分率从43.7%增加到76.4%,pEGFP-Bak组细胞凋亡率明显高于pEGFP-Pax组(P<0.05);应用不同的化学诱导剂均可以得到同样的结果;且Bcl-2不能够明显阻止Bak诱导的细胞凋亡.结论:Bak基因明确诱导线粒体碎裂和细胞色素C释放,导致细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的效果明显大于Bax基因,并且其作用独立于Bax基因功能之外.
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文献信息
篇名 Bak在细胞凋亡期间对线粒体形态学的影响
来源期刊 吉林大学学报(医学版) 学科 生物学
关键词 细胞凋亡 细胞色素C 线粒体 Bax基因 Bak基因
年,卷(期) 2008,(5) 所属期刊栏目 基础研究
研究方向 页码范围 773-777
页数 5页 分类号 Q255|Q244
字数 语种 中文
DOI
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作者信息
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1 乔伟 桂林医学院生物技术学院 26 65 4.0 6.0
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1671-587X
22-1342/R
大16开
吉林省长春市新民大街828号
12-23
1959
chi
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