华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶基因的分子表达、蛋白纯化与定性

• 作者: 吴志良 崔惠儿 张贤昌 裴福全 长野功 高桥优三
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 磷酸甘油酸激酶 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 20-24
• 页数: 5页
• 分类号: R532.23
• 字数: 4384字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-5039.2008.06.006

摘要

目的 选取一个华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶基因进行克隆表达、纯化,并鉴定该重组蛋白的分子特性及潜在的诊断应用价值.方法 根据Genbank中华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶基因顺序(L 47982)设计引物,从华支睾吸虫成虫cDNA扩增特异性片段,与pTrcHis表达载体连接,重组质粒在大肠埃希菌DH5α中表达,使用亲合层析柱纯化重组蛋白.分别使用SDS-PAGE、Western blot及ELISA鉴定重组蛋白的一般分子特性和抗原活性,以免疫组化染色法探讨该抗原在成虫组织内的分布.结果 重组质粒在大肠埃希菌中成功表达,亲合层析获得高纯度的磷酸甘油酸激酶融合蛋白(rCsPGK),分子量约4.7×104.Western blot显示该重组抗原与华支睾吸虫感染阳性血清有较好的结合反应.ELISA结果 显示,rCsPGK用于检测特异性抗体在数值上可区分阴阳性血清,受检阳性与混合阴性血清A值之比(P/N)为1.22～1.86,明显低于使用全虫粗抗原的P/N值(4.24～8.21).免疫组化显示,针对rCsPGK的抗体与成虫体壁的上皮组织、卵黄腺及卵巢内虫卵有明显的染色反应.结论 该研究用pTrcHis原核表达系统成功克隆和表达了华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶融合蛋白.使用亲合层析能获得高纯度、具有潜在诊断应用价值的rCsPGK抗原,但用于检测特异性抗体的敏感性低于全虫粗抗原.免疫组化表明,华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶可能主要分布在成虫体壁的上皮组织、卵黄腺及卵巢内虫卵等组织内.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔惠儿	广东省疾病预防控制中心寄生虫病防治研究所	14	85	5.0	9.0
2	张贤昌	广东省疾病预防控制中心寄生虫病防治研究所	43	440	13.0	18.0
3	裴福全	广东省疾病预防控制中心寄生虫病防治研究所	29	185	8.0	12.0
4	长野功	日本岐阜大学医学部寄生虫学研究室	3	13	2.0	3.0
5	吴志良	日本岐阜大学医学部寄生虫学研究室	1	1	1.0	1.0
6	高桥优三	日本岐阜大学医学部寄生虫学研究室	1	1	1.0	1.0