HPV16 E7"自杀性"DNA 疫苗的构建及其体外表达特性研究

• 作者: 左凤琼 施桥发 李婉宜 李明远 李虹 王保宁 王红仁 蒋忠华
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒 宫颈癌 "自杀性"DNA 疫苗 治疗性疫苗 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 165-168
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9
• 字数: 2936字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2008.02.001

摘要

目的 构建人乳头瘤病毒 16 型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA 疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用.方法 以 pET32/E7 质粒为模板.用PCR方法扩增 HPV16 E7 基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经 PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染 BHK-21 细胞,然后用免疫荧光技术检测 HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用.结果 PCR 扩增得到约 400 bp 的目的 基因片段,测序结果与 GenBank 中的东亚型 HPV16 E7 基因序列 100%同源.免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7 重组质粒能在 BHK-21 细胞中表达目的 基因.TUNEL 检测证实,pSCA/E7 重组质粒能诱导被转染的 BHK-21 细胞发生凋亡.结论 成功构建 HPV16 E7 基因的重组质粒 pSCA/E7,该重组质粒可在 BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡.