GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF的构建

• 作者: 冯彩霞 李奇灵 王英 王运萍 高尚风
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: NuTu-19细胞 粒细胞单核细胞集落刺激因子 卵巢肿瘤 免疫治疗
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 499-503
• 页数: 5页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文

摘要

目的 构建能分泌表达粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF.方法 将T-h GM-CSF重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,筛选出耐药性单克隆菌落送测序.利用PCR技术扩增出GM-CSF目的 基因片段,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化入大肠杆菌中扩增,用SDS碱裂解法提取Teasy-GM-CSF重组质粒,用限制性内切酶酶切Teasy-GM-CSF重组载体,连入经相同酶酶切的pLXSN反转录病毒载体中.用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞系进行病毒包装,用含有病毒的上清液感染卵巢癌NuTu-19细胞,经G418加压筛选感染成功的NuTu-19/GM-CSF细胞,用免疫细胞化学和ELISA法检测NuTu-19/GM-CSF分泌表达GM-CSF蛋白的情况.结果 T-h GM-CSF重组质粒测序结果与GenBank Accession#:NM_000758基因序列对比后确定为人类GM-CSF基因编码序列;PCR产物酶切电泳在Mark 400-500bp中有一条带,符合GM-CSF基因序列长度;重组Teasy-GM-CSF质粒用EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切后,电泳鉴定在400-500bp之间有一目的 条带,重组反转录病毒质粒pLGM-CSFSN酶切电泳有目的 条带;G418加压筛选感染后的NuTu-19细胞,14d后慢慢形成单克隆继续生长;免疫细胞化学检测到感染成功的NuTu-19细胞膜表面有明显的棕褐色颗粒沉淀,ELISA法检测细胞培养上清液中GM-CSF的质量浓度为150pg/mL.结论 成功构建了能分泌表达人GM-CSF蛋白的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF,为以后研究卵巢癌免疫治疗提供必备、有效、可靠的工具基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李奇灵	西安交通大学医学院第一附属医院妇产科	20	66	5.0	6.0
2	高尚风	西安交通大学医学院第一附属医院妇产科	35	90	5.0	7.0
3	王英	西安交通大学医学院第一附属医院妇产科	20	25	3.0	4.0
4	王运萍	西安交通大学医学院第一附属医院妇产科	5	3	1.0	1.0
5	冯彩霞	西安交通大学医学院第一附属医院妇产科	3	3	1.0	1.0