抗CMTM4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定

• 作者: Markus Plate 宋泉声 李婷 王彧 邵陆宁 郭晓欢 韩文玲 马大龙
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CMTM4 多肽抗体 免疫亲和纯化
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 41-44
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|R392-33
• 字数: 3929字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.01.013

摘要

目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能.方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联.其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家兔,制备Ab1;而第4条多肽为CMTM4-v1所特有,单独免疫家兔,制备Ab2.ELISA法检测抗体效价.免疫亲和层析法纯化后,进行Western blot和免疫组织化学检测,鉴定这2种抗体的特异性与适用范围.结果:得到兔抗人CMTM4多肽抗体Ab1和Ab2,效价分别达1:105和1:106.纯化后的Ab1用于Western blot可特异识别超表达的CMTM4-v1和v2,并可用于免疫组织化学实验;而Ab2仅可用于Western blot,特异性识别超表达的CMTM4-v1.Ab1还可特异识别小鼠内源性Cmtm4.结论:用多肽免疫家兔制备的2种抗CMTM4抗体不仅具有较高的效价以及特异性,并且Ab1还可以特异识别小鼠Cmtm4,为CMTM4的功能研究提供了有力的支持.