禽波氏杆菌免疫荧光检测和抗体检测ELISA方法的建立与应用

• 作者: 刘冠华 崔金生 朱瑞良 杨春晓 王小娥 肖海君
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽波氏杆菌 OMP 间接ELISA 间接免疫荧光(IFA)
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1715-1720
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61|S855.12
• 字数: 5569字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.12.014

摘要

采用改良的Wooldridge法提取了禽波氏杆菌外膜蛋白(OMP),通过Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量为320 μg/mL,SDS-PAGE电泳检测发现禽波氏杆菌P5株OMP含有5种成分,相对分子质量分别为58、47、41、36、24 ku;P8株OMP含有6种成分,相对分子质量分别为58、47、41、38、21、16 ku.将提取的禽波氏杆菌OMP免疫健康青紫兰兔,每周免疫1次,共免疫4次,获得了兔抗禽波氏杆菌OMP高免血清,以此高免血清建立了检测禽波氏杆菌的间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)方法,并对其工作条件进行了优化和筛选,试验结果表明间接ELISA抗原、抗血清最佳工作浓度分别为10μg/mL、1:12 800,酶标二抗工作浓度为1:5 000,最佳包被条件为4℃、24 h,最佳封闭条件为37℃、1 h;间接免疫荧光(IFA)兔高免血清释释度为1:20,FITC标记羊抗兔IgG稀释度为1:10,感作时间为45 min时,禽波氏杆菌特异性黄绿色荧光最清晰,非特异性荧光最弱.经临床检测证明该两种方法均具有简便、快速、特异性强的特点,为禽波氏杆菌病的流行病学、血清学调查和临床快速诊断奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱瑞良	山东农业大学动物科技学院	161	909	16.0	22.0
2	崔金生	山东农业大学动物科技学院	10	58	4.0	7.0
3	杨春晓	山东农业大学动物科技学院	6	31	3.0	5.0
4	王小娥	山东农业大学动物科技学院	5	23	2.0	4.0
5	刘冠华	山东农业大学动物科技学院	10	56	6.0	7.0
6	肖海君	山东农业大学动物科技学院	8	32	3.0	5.0