猪源戊型肝炎病毒基因Ⅳ型ORF3编码蛋白的表达及鉴定

• 作者: 于芳 刘玉生 夏志平 孙中锋 屈勇刚 朱光泽 贾鹏 金宁一 陆民
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 结构蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 8-12
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 2887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2008.01.002

摘要

通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF3全基因,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-ORF3表达载体,转入E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达.Ni-NTA层析柱纯化表达蛋白,用SDS-PAGE、免疫印迹、ELISA等方法分析鉴定表达产物.结果成功扩增到345 bp的目的基因;构建了重组表达载体pET28a-ORF3;转化宿主菌E.coli BL21 (DE3)后表达产物的相对分子质量在6.50～16.5 kDa之间,与预期表达的目的蛋白相对分子质量相符;表达的目的蛋白能与阳性猪源和人源血清发生特异性反应,证实其具有较好的反应原性.