靶向Notchl基因siRNA真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 刘双林 史涛平 吴准 吴正启 周辉霞 居正华 张旭 徐华 王保军 胡建庭 艾星
• 来源期刊: 临床泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Notchl 小分子干扰RNA 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 391-394
• 页数: 4页
• 分类号: R394.21
• 字数: 3419字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1420.2008.05.027

摘要

目的:构建并鉴定靶向Notchl基因的siRNA真核表达载体.方法:根据Notchl基因cDNA序列,设计靶向目的基因的3个siRNA靶序列,将其插入U6启动子下游,克隆到真核表达载体pGsensil中,并进行酶切鉴定和DNA测序鉴定.采用脂质体介导法将构建好的3个siRNA表达载体分别转染T24人膀胱癌细胞中,荧光下观测转染效率.RT-PCR检测Notchl基因mRNA在转染前后的表达.结果:转染48 h后3个siRNA表达载体均不同程度的抑制了Notchl mRNA的表达.酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确.结论:成功构建的靶向Notchl的siRNA真核表达载体,具有抑制Notchl基因mRNA表达的功能,可能为膀胱癌基因治疗研究提供一个新的方向.