AAV-TGFβ1的构建及其与AV-TGFβ1对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较

• 作者: 王德春 胡有谷 赛佳明
• 来源期刊: 中国骨与关节损伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 腺病毒 转化生长因子β1 髓核 蛋白多糖
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 116-118
• 页数: 3页
• 分类号: R6
• 字数: 2778字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9935.2008.02.010

摘要

目的 探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较.方法 采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI酶切位点.将TGFβ1基因亚克隆于腺相关病毒(AAV)载体中,并经酶切和测序分析进行鉴定.AAV-TGFβ1病毒被包装并转染H293细胞,通过免疫荧光检测AAV介导的目的基因表达.利用AAV-EGFP病毒检测AAV对髓核细胞的转染效率.AAV-TGFβ1和AV-TGFβ1分别转染髓核细胞后,通过Antonopulos法检测蛋白多糖的合成.结果 测序分析证明TGFβ1序列与NCBI Gene Bank所报道的一致.经酶切鉴定证实AAV-TGFβ1重组质粒被成功构建.AAV可介导TGFβ1高效表达并高效转染髓核细胞.AV-TGFβ1可快速一过性地促进髓核细胞蛋白多糖合成,而AAV-TGFβ1可稳定促进蛋白多糖合成.结论 AAV-TGFβ1病毒被成功构建并可稳定地促进髓核细胞蛋白多糖的合成.