H5亚型猪流感病毒HAl重组蛋白的制备及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 周继勇 尹可 郭军庆 黄杰 黎满香
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 H5亚型 HAl蛋白 ElISA
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 762-766
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5|R446.61
• 字数: 3759字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.09.007

摘要

利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒(SIV)的HA1基因,克隆到原核表达载体Pet-28a(+),构建了重组表达质粒pET28a-HA1/H5,用重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,以镍螯合层析纯化表达蛋白;通过优化反应条件,建立了基于HA1重组蛋白的H5亚型SIV抗体间接ELISA(iHAI-ELISA)检测方法.SDS-PAGE分析结果显示,在大肠杆菌中成功表达了分子质量为45ku的His-HA1融合蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在;Western-blot分析结果显示,表达蛋白能被抗His单克隆抗体和抗H5亚型SIV阳性血清特异识别.优化iHAI-ELISA中HA1/H5重组蛋白的包被浓度为0.31 μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1:100.特异性测定结果显示,iHAI-ELISA方法不与H1、H3、H9亚型猪流感病毒抗体以及猪圆环病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒阳性血清发生交叉反应;iHAI-ELISA方法与血凝抑制试验的符合率达93.5%.表明利用重组HA1蛋白建立的检测H5亚型SIV抗体的ELISA方法具有良好的特异性和敏感性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黎满香	湖南农业大学动物医学院	64	282	9.0	14.0
2	黄杰	湖南农业大学动物医学院	19	72	5.0	8.0
4	尹可	湖南农业大学动物医学院	3	11	2.0	3.0
8	郭军庆	浙江大学动物预防医学研究所	11	82	5.0	8.0