人p27kip1基因的克隆及其真核表达载体的构建

• 作者: 吴芃 左翼 谭万龙 郑少斌
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: p27kip1 基因表达 分子克隆 人
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 285-287,305
• 页数: 4页
• 分类号: R373.11
• 字数: 3139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.04.001

摘要

目的 克隆人p27kipl,基因并构建其真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 根据p27kip1已知序列设计引物,分别在上下游引入Mlu I和Spe I酶切位点,从人肾脏组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,亚克隆入携带GFP报告基因的pWPXL真核载体中,经筛选获得正确的克隆,并通过双酶切凝胶电泳及测序鉴定.将成功构建的质粒在脂质体介导下转染肾癌786-0细胞,并通过RT-PCR及Western-blot检测表达情况.结果 克隆了人p27kip1基因,与GenBank中序列比对无误;真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,成功构建了真核表达载体.转染肾癌786-0细胞48 h后,p27kip1蛋白出现高表达.结论 成功克隆了p27kip1基因,构建了其真核表达载体并在肾癌细胞中成功表达,为p27kip1在肾肿瘤中的进一步研究提供了工作基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴芃	南方医科大学南方医院泌尿外科	64	260	7.0	15.0
2	郑少斌	南方医科大学南方医院泌尿外科	137	824	15.0	22.0
3	谭万龙	南方医科大学南方医院泌尿外科	96	554	13.0	20.0
4	左翼	南方医科大学南方医院泌尿外科	15	83	5.0	9.0