β-catenin特异的shRNA干扰对K562细胞作用的初步研究

• 作者: 于珍 李业楠 李增军 李茜 李长虹 王亚非 王国蓉 邱录贵
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: β-联蛋白 shRNA K562细胞 CML
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 白血病基础
• 页码范围: 725-729
• 页数: 5页
• 分类号: R733.7
• 字数: 3918字
• 语种: 中文

摘要

本研究在探讨β-联蛋白(β-catenin)序列特异的小发夹RNA(shRNA)干扰其表达后对K562细胞生长的影响.采用脂质体介导方法,将含编码β-联蛋白特异的shRNA的质粒转入K562细胞,经G418筛选提高细胞阳性率,用实时定量PCR和Western blot分别检测干扰后β-联蛋白转录水平及蛋白水平的表达变化,通过绘制生长曲线、MIT测定及集落培养等方法观察干扰后细胞生长能力的差别.结果发现:与对照组相比,转染后72小时干扰质粒可有效降低K562细胞β-联蛋白mRNA水平的表达(p＜0.05),但短期培养对蛋白水平的表达未发现明显影响.经G418长期筛选后,对照组可见细胞阳性率逐渐提高,并可筛选到几近100%阳性的细胞克隆,而干扰组细胞则逐渐死亡.在G418存在下,干扰组与对照组K562细胞短期增殖曲线及MIT结果显示两组间无明显差异,但集落培养发现,干扰组细胞无论集落形成率(p＜0.001)还是形成的集落大小均明显低于对照组,说明干扰质粒可影响细胞的集落形成能力.结论:β-联蛋白特异的shRNA干扰可以有效降低K562细胞中β-catenin基因的表达,降低细胞集落形成能力;K562细胞的生长依赖于β-联蛋白的存在,针对β-联蛋白的RN Ai治疗或其它靶向治疗可能对CML治疗有效.