SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR方法快速鉴定新城疫病毒毒力

• 作者: 伍明山 伍祥龙 周碧君 文明 李永明 殷俊磊
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 新城疫病毒 SYBR Green Ⅰ模式荧光RT-PCR 毒力 鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 检验检疫
• 页码范围: 80-83
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2947字
• 语种: 中文

摘要

为快速鉴定不同新城疫病毒株(NDV)毒力,我们以NDV F蛋白裂解位点附近的基因序列自行设计1对引物,对不同毒力NDV毒株进行荧光RT-PCR扩增,根据其扩增效率及扩增产物熔解温度(Tm)值大小进行NDV毒株毒力的鉴定,建立了能区分NDV强弱毒株的SYBR Green I荧光RT-PCR方法;同时将其与鸡胚平均致死时间(MDT)测定和F蛋白裂解位点序列分析结果进行比较.结果发现:建立的SYBR Green I 荧光RT-PCR方法只需4 h即可判定结果,NDV强弱毒株扩增产物Tm值为(83±0.5)℃且有2个峰值,阴性对照Tm值为(81±O.5)℃且只有1个峰值;对NDV强毒株的扩增效率即Ct值在11-20之间,NDV弱毒株Ct值在25-30之间,阴性对照Ct值在30以上,Ct值在20-25之间为强弱毒株混合物.该方法检测结果与MDT测定和F蛋白裂解位点分析结果一致.应用SYBR Green I模式荧光RT-PCR方法与普通RT-PCR方法和鸡胚接种鉴定方法分别对80份临床组织样品进行检测,强毒株的检出率均为53.75%(43/80),而弱毒株的检出率相应为31.25%(25/80)、27.50%(22/80)和35.00%(28/80),检出符合率达89.3%以上.这些结果表明建立的SYBR Green I荧光RT-PCR方法具有特异、准确、快速等特点,可用于临床病料样本NDV毒株的毒力鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周碧君	贵州大学动物科学学院	218	1054	13.0	22.0
2	文明	贵州大学动物科学学院	219	646	10.0	14.0
3	李永明	贵州大学动物科学学院	61	350	9.0	15.0
4	殷俊磊	贵州大学动物科学学院	13	49	4.0	6.0
5	伍明山		4	0	0.0	0.0