鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析

• 作者: 刘红霞 岳城 张少华 才学鹏 贾万忠 郭爱疆 闫鸿斌
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 毒害艾美耳球虫 微线蛋白5 基因克隆 重组表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1575-1580
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723|Q786
• 字数: 4347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.11.020

摘要

根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白5(Microneme protein 5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E. necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段.将基因片段与pMD18-T simple载体连接,重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1 470 bp,编码490个氨基酸.EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE检测,表达产物为相对分子质量约57.5 ku的融合蛋白.Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E. necatrix阳性血清识别.用重组蛋白免疫昆明鼠,一免后15 d即可检测到相应抗体,且抗体在三免后40 d仍维持较高水平,证实重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体.