小鼠γ干扰素(mIFN-γ)基因克隆及其逆转录病毒载体的构建和转基因细胞系的建立

• 作者: 李厚达 杨玲 殷俊 茅慧华
• 来源期刊: 四川动物
• 学科: 生物学
• 关键词: γ-干扰素 逆转录病毒 载体构建 筛选
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 26-30
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4629字
• 语种: 中文

摘要

本研究自小鼠脾脏淋巴细胞中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增出mIFN-γ基因,按常规方法构建T载体克隆,酶切鉴定,测序分析.结果表明:获得mIFN-γ基因全长为468 bp,与GenBank中已发表的mIFN-γ基因核苷酸同源性为100%.通过双酶切将该基因片段插入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,脂质体法共转染包装细胞293T ,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h 后,加入Zeocin 进行筛选,挑选出能稳定表达抗性的细胞株,经RT-PCR检测出转基因L929细胞株中mIFN-γ基因的转录.结果表明: 构建了含mIFN-γ基因的重组逆转录病毒载体,并筛选出整合有mIFN-γ基因的L929细胞株,为基因治疗的后续研究和大鼠单克隆抗体的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李厚达	扬州大学比较医学中心	89	740	16.0	21.0
2	殷俊	扬州大学比较医学中心	34	164	9.0	11.0
3	杨玲	扬州大学比较医学中心	24	137	8.0	11.0
4	茅慧华	扬州大学比较医学中心	17	251	12.0	15.0