14-3-3σ逆转录病毒载体的构建及稳定转染HaCat细胞系的建立

• 作者: 丁振华 周美娟
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录病毒 14-3-3σ 稳定转染的 HaCat 细胞系
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1890-1893
• 分类号: R3
• 字数: 2851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2010.11.010

摘要

目的:构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系.方法:以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内进行扩增,刷选阳性克隆,酶切和测序验证后,转染293vr细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒栽体.将逆转录病毒载体感染HaCat细胞后Western、实时荧光定量PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pLEGFP-N1-14-3-3σ;稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.Western和实时荧光定量PCR法表明14-3-3σ表达明显增强.结论:成功构建了14-3-3σ逆转录病毒载体,并构建了英稳定转染的HaCat细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁振华	南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系	70	187	8.0	9.0
2	周美娟	南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系	45	150	7.0	10.0