syk基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞侵袭性抑制作用的体外研究

• 作者: HU Jie LI Run-Qing SONG Xiao-Tian SONG Xiao-Zhen 单保恩 周艳 齐义新
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺癌 Syk 真核表达载体 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 698-702
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4417字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建非受体型蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在乳腺癌细胞中稳定表达,为进一步探讨Syk抑制肿瘤细胞侵袭转移的具体机制奠定基础.方法:构建syk基因的真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/syk,以脂质体介导法转染Syk表达缺失的MDA-MB-231细胞,经G418筛选,获得syk基因稳定表达的MDA-MB-231/syk细胞.通过流式细胞术和RT-PCR技术检测转染细胞MMP-9的表达变化,用体外迁移和侵袭力实验测定转染细胞的迁移和侵袭能力.结果:构建了syk基因的真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/syk,并在MDA-MB-231细胞中获得稳定表达.与野生型MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/syk细胞表达MMP-9的水平明显降低(P＜0.01),并且该细胞的迁移和侵袭能力也明显降低(P＜0.01).结论:候选抑癌基因syk通过脂质体可有效转染MDA-MB-231细胞,MDA-MB-231/syk细胞迁移和侵袭能力明显降低,这为进一步研究Syk在体内的抑瘤作用和乳腺癌基因治疗奠定了基础.