TIMP-3基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用

• 作者: 尹光浩 王丹 王振宇 石光
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 组织基质金属蛋白酶抑制剂3 真核表达载体 MDA-MB-453细胞系
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 89-93
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160118

摘要

目的:构建组织基质金属蛋白酶抑制剂3 (TIMP-3)真核表达载体并转染乳腺癌MDA-MB-453细胞,探讨TIMP-3对MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用.方法:采用RT-PCR法从人新鲜胎盘组织中获得TIMP-3 cDNA,连接至pMD18-T载体,EcoR Ⅰ、XbaⅠ双酶切pMD18-T-TIMP3重组质粒及pcDNA3.1载体并连接,构建pcDNA-TIMP-3真核载体,酶切鉴定、测序.将乳腺癌MDA-MB-453细胞分为正常对照组、pcDNA空载体组(只转染pcDNA空载体)和pcDNA-TIMP-3组(转染pcDNA-TIMP-3).Western blotting法测定蛋白表达,采用MTT法和Boyden小室侵袭实验测定各组细胞的增殖活性及侵袭能力.结果:重组载体经过EcoR Ⅰ和XbaⅠ酶切后,产生633 bp的TIMP-3目的片段和pcDNA 3.1线性化载体,经自动测序仪测定TIMP-3序列完全正确.转染重组载体后MDA-MB-453细胞稳定表达了TIMP-3,与正常对照组和pcDNA空载体组比较,pcDNA-TIMP-3组细胞增殖活性明显降低(P＜0.05),穿透以Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)和玻璃连接蛋白(VN)包被的Matrigel膜的侵袭细胞数明显减少(P＜0.05).结论:成功构建pcDNA3.1-TIMP-3真核表达载体,可在MDA-MB-453细胞中高表达TIMP-3蛋白,并对MDA-MB-453细胞生长及侵袭性有抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石光	吉林大学第二医院乳腺外科	27	74	5.0	8.0
2	王振宇	吉林大学第二医院乳腺外科	24	44	3.0	5.0
3	王丹	吉林大学第二医院乳腺外科	191	680	12.0	17.0
4	尹光浩	吉林大学第二医院乳腺外科	13	84	4.0	9.0