实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌的研究

• 作者: 朱敏 杨肃文 梅玲玲 许海红 谢鑫友 金红
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜肺军团菌 TaqMan-MGB探针 实时荧光PCR mip基因
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 856-861
• 页数: 6页
• 分类号: R4
• 字数: 5395字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.09.021

摘要

目的 建立TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌技术,为临床和环境样品检测嗜肺军团菌提供可实用工具.方法 在对嗜肺军团菌mip序列进行分析、比较基础上,设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化,实现对嗜肺军团菌的快速检测;用克隆到pMD-19T载体上的嗜肺军团菌mip基因阳参片段和不同菌株验证方法的敏感性和特异性.结果 当用热裂解法提取DNA,25μl的反应体系中包括上、下游引物(20μmol/L)各0.6μl,探针(20μmol/L)0.4μl,模板DNA 6.0μl,反应条件为预变95℃20 S,变性95℃10 s,退火50℃ 40 s,40个循环时,TaqMan-MGB探针实时荧光PCR技术对嗜肺军团菌mip基因阳参片段最低检测浓度为0.71拷贝/μl,其循环阈值(Ct值)与模板浓度具有极好的对应关系(r=0.999);1株嗜肺军团菌标准株、12株嗜肺军团菌分离株的Ct值在13.23～16.04之间,而包括金黄葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺菌共计76株其他菌PCR Ct值均大于30;整个检测过程仅需1.5 h.结论 TaqMan-MGB探针的嗜肺军团菌实时荧光PCR检测方法具有特异性和敏感性、易操作、结果准确可靠等优点,可用于嗜肺军团菌检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梅玲玲		83	735	14.0	25.0
2	朱敏		40	535	12.0	23.0
3	杨肃文		17	54	4.0	6.0
4	金红		15	65	4.0	7.0
5	谢鑫友		48	207	8.0	11.0
6	许海红		4	17	2.0	4.0