嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测

• 作者: 单小云 屠平光 应延风 胡野
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜肺军团菌 lvgA基因 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 546-550
• 分类号: R378
• 字数: 3845字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.06.009

摘要

目的 确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR.方法 通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v. 2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域.根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列.根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测.结果 研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面.不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%.在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,最高达4.3倍(P<0.05).基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌.结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单小云	金华市中心医院检验科	34	154	6.0	11.0
2	胡野	金华职业技术学院人畜共患病研究所	78	340	9.0	14.0
3	应延风	金华职业技术学院人畜共患病研究所	40	158	7.0	11.0
4	屠平光	金华职业技术学院人畜共患病研究所	15	33	4.0	4.0