嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达

• 作者: 刘明杰 廖涛 张莉 张雷 王涛 田玉 陈宪 陈建平
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜肺军团菌 htpA基因 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 114-117
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 3055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.02.005

摘要

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备.方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGhtpA,重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后,转化宿主菌大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定.结果扩增出了291bp完整的htpA基因,构建了原核表达重组质粒pGhtpA,并检测到约36kDa 的GST-htpA融合蛋白质表达条带.结论成功克隆了嗜肺军团菌htpA基因并使HtpA蛋白在原核表达系统中得到了有效的表达,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础.