全血直接多重PCR法快速检测Y染色体微缺失

• 作者: BU Ying WU Hai-ping XIANG Jing-ying YAO Bing ZHOU Guo-hua 崔英霞 张晓丹 芦洪涌 黄欢
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Y染色体微缺失 无精症因子 多重聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 406-409
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1003-9406.2008.04.008

摘要

目的 以全血为起始模板直接进行PCR多重扩增,建立一种快速、简便的Y染色体微缺失检测方法.方法 用作者自行研制的"HpH-Buffer",以不经基因组DNA提取的抗凝全血为模板直接进行多重PCR扩增.分别在5管中检测无精症因子(azoospermia factor,AZF)区域的a区、b区和c区共12个序列标签位点(sequence tagged sites,SIS).为保证方法有效性,加做Y染色体性别决定区(sex-determining region Y,SRY)和X/Y连锁锌指蛋白基因(X-linked or Y-linked zinc finger gene,ZFX/Y)作为内控.同时,为考察方法的准确性,对每例血液样本提取基因组DNA平行实验.结果 共检测了156例男性血液样本,每组实验均加做阳性对照(正常已生育男性样本)和阴性对照(正常女性样本),以保证实验有效性.结果表明,156例样本中有144例无缺失,AZFa区缺失1例,AZFb区缺失1例,AZFc区缺失7例,AZFb和AZFc区缺失1例,AZFa、AZFb和AZFc区全缺失2例.以全血为模板和以基因组DNA为模板进行扩增所得到的实验结果完全一致.结论 所建立的方法省略了DNA提取这一繁琐的步骤,减少了PCR实验过程中可能出现的污染,缩短了操作时间,节约了实验成本.可在2小时内完成所有检测过程,有效地提高了临床检测效率."HpH-Buffer"的试剂成本很低,全部检测成本与普通PER扩增基本相同.