人源化卵巢癌单链抗体基因的构建与表达

• 作者: 崔满华 张赢予 焦平 王丁丁 王文加 苏曼曼 许天敏 谷丽萍
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 卵巢肿瘤 单链抗体 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 217-220
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.02.012

摘要

目的:通过基因工程技术获得完全人源化的卵巢癌患者自身的单链抗体并在毕氏酵母中获得表达,为人源化单链抗体(ScFv)在卵巢癌的诊断与治疗的应用提供实验基础.方法:用TRIZOL法自卵巢癌患者的淋巴细胞中提取RNA,利用SOEingPCR方法分别获得VH、VL基因,构建真核表达载体pPICZαa/ScFv.电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选转染阳性克隆,SDS-PAGE法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的ScFv的表达,筛选高表达工程菌.结果:构建ScFv基因,VH与VL连接后得到700 bp左右的条带,ScFv基因在毕赤酵母中获得表达,在26 000处出现目的条带.结论:获得ScFv基因及其真核表达载体以及高效表达ScFv的毕赤酵母工程菌.