稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定

• 作者: 丁庆莉 刘梦蕾 沈茜 龙宪连
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 可诱导共刺激分子 重组逆转录病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 254-258
• 页数: 5页
• 分类号: R392.111
• 字数: 3468字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2008.03.006

摘要

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定.方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOS cDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株.将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200 ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以 1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照.结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株.3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P＜0.05或P＜0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%.结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈茜	第二军医大学长海医院实验诊断科	184	1189	17.0	25.0
2	龙宪连	第二军医大学长海医院实验诊断科	4	5	2.0	2.0
3	丁庆莉	第二军医大学长海医院实验诊断科	3	22	2.0	3.0
4	刘梦蕾	第二军医大学长海医院实验诊断科	4	10	2.0	3.0