人自身抗原Sm B'基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

• 作者: 兰小鹏 冯福英 吴文冰 朱忠勇 杨湘越
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 毕赤酵母 自身抗原 免疫酶技术
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 1178-1181
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.10.024

摘要

目的 通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母中表达人自身抗原Sm B'.方法 PCR扩增Sm B'基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-Sm B'.用电穿孔法转化酵母菌Sm D1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(WB)鉴定,并用免疫酶斑点法和免疫印迹法(immunoblot,IBT)检测与评价分析30例系统性红斑狼疮(SLE)患者、30例混合结缔组织病患者和30名健康体检者血清中抗-Sm B'水平差异.结果 PCR产物约700 bp,与预期657 bp接近,pPIC9k-Sm B'重组阳性克隆测序结果与核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物Sm B'的相对分子质量约32 000,WB法证实表达产物具有天然Sm B'分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的 表达条带.免疫酶斑点法检测阳性率为46.7%(42/90),IBT的检测阳性率为51.1%(46/90);2种方法检测结果一致性较佳(Kappa值=0.911 2,P<0.01).结论 Sm B'在巴斯德毕赤酵母中分泌表达成功,这为Sm B'试剂盒研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰小鹏	南京军区福州总医院全军检验医学研究所	103	463	11.0	14.0
2	杨湘越	南京军区福州总医院全军检验医学研究所	50	247	9.0	13.0
3	吴文冰	南京军区福州总医院全军检验医学研究所	10	35	3.0	5.0
4	朱忠勇	南京军区福州总医院全军检验医学研究所	98	953	11.0	29.0
5	冯福英	南京军区福州总医院全军检验医学研究所	15	74	5.0	8.0