蛋白质巯基亚硝基化对RSC-364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响

• 作者: 丛斌 付丽红 倪志宇 刘威 左敏 张国忠 张晓静 李淑瑾 马春玲
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白质巯基亚硝基化 一氧化氮 cAMP反应元件结合蛋白 RSC-364细胞 关节炎,类风湿
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 896-900
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.05.013

摘要

目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响.方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100 μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100 μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10.mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTY)及溶剂单独或联合应用孵育15 min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素-1β(rIL-1β)10 μg/L孵育RSC-364细胞1 h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响.结果:RSC-364细胞总蛋白经GS-NO孵育后亚硝基化蛋白表达水平明显增高,而应用DTT可抑制亚硝基化水平;GSNO与RSC-364细胞核蛋白孵育后,明显抑制了rIL-1β诱导的CREB活性(P＜0.01),GSNO的作用可被DTT所逆转(P＜0.01).结论:NO可通过亚硝基化作用抑制RSC-364细胞CREB活性.