人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

• 作者: 傅奕 胡书群 裴冬生 赵惠仁 陆梁
• 来源期刊: 实用临床医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素18 定点突变 干扰素-γ 核因子-κB
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-27,41
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3961字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2008.05.007

摘要

目的 研究IL-18结构与功能的关系.方法 用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R.将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α.经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在.菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性.然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性.结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92 %以上.突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%.结论 在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡书群	徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	28	126	4.0	10.0
2	裴冬生	徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	68	201	8.0	10.0
3	傅奕	扬州大学医学院生化教研室	17	98	6.0	9.0
4	陆梁	徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	9	91	3.0	9.0
5	赵惠仁	徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心	14	67	4.0	8.0