Survivin基因诱饵表达载体的构建和鉴定

• 作者: 刘北忠 刘畅 王东生 王春光 王翀 郝坡 金丹婷 钟梁
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Survivin基因 诱饵载体 诱饵蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（22）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3254-3257,3261
• 页数: 5页
• 分类号: R733.73
• 字数: 4023字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建Survivin基因诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础.方法 从人K562细胞中提取总RNA作为模板,逆转录得到Survivin cDNA,通过特异引物扩增Survivin基因的ORF区,然后与诱饵表达载体pGBKT7连接,构建诱饵表达载体pGBKT7-Survivin,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-Survivin转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果 成功扩增了Survivin基因的ORF区,并成功将其克隆到诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果 正确.诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白.结论 成功构建了Survivin基因的ORF区的酵母诱饵表达载体,为建立酵母双杂交系统筛选Survivin蛋白靶蛋白奠定基础.