柽柳类锌指基因ThZFL酵母诱饵表达载体的构建及其表达验证

• 作者: 夏德安 曲冠证 王亚军 王英 臧丽娜 郑唐春
• 来源期刊: 东北林业大学学报
• 关键词: 柽柳 ThZFL基因 酵母诱饵表达载体 自激活作用
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 页码范围: 4-7,15
• 分类号: Q784|Q939.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5382.2011.12.002

摘要

利用PCR技术从柽柳cDNA文库中克隆出ThZFL目的基因序列,连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态,经检验后提取质粒,用BamH I和EcoR I限制性内切酶双酶切pMD18-T-ThZFL载体和pG-BKT7-BD空载体,并将酶切产物胶回收后,用T4 DNA连接酶连接过夜后转化大肠杆菌DH5α感受态获得目的基因转化子pGBKT7-ThZFL,对转化子进行质粒PCR检验、质粒酶切检验、DNA测序鉴定.将测序检验正确的pG-BKT7-ThZFL转化子,转化酵母Y2Hgold菌株,对转化后的酵母涂布SD/-Trp、SD/-Trp/X、DDO、TDO平板,验证目的基因的自激活作用,通过对酵母生长曲线的测量验证诱饵蛋白的毒性作用.试验结果表明:用于筛选与ThZ-FL表达蛋白相互作用的靶蛋白的酵母诱饵载体构建成功,重组诱饵载体pGBKT7-ThZFL对酵母自身没有毒害作用,可以继续进行下一步的文库筛选工作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王英		3	8	1.0	2.0