pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒转染兔骨髓间充质干细胞

• 作者: 库热西·玉努斯 白靖平 詹玉林 黄国虹
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 兔 骨髓干细胞 pIRES2-EGFP 骨形成蛋白2
• 年，卷（期）: 2008,（47）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9226-9230
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6098字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.47.010

摘要

背景:骨形成蛋白2是骨基质中最重要骨生长因子,主要生物学作用是促进未分化的间充质细胞和骨系细胞的募集和分化,是骨生成的启动因子,可以作为骨修复基因治疗的理想目的基因.目的:使用前期已经构建成功的pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒转染兔骨髓间充质干细胞.设计、时间及地点:细胞学观察实验,于2007-12/2008-06在新疆医科大学自治区地方病分子牛物学实验室完成.材料:良种新两兰大白兔由新疆医科大学动物试验中心提供,pIRES2.EGFP.BMP-2由奉校分子生物学实验室构建、保存.方法:采用贴壁法及密度梯度离心法提取骨髓间充质干细胞.采用脂质体介导转染法将pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒转染兔骨髓间充质干细胞.主要观察指标:通过荧光显微镜、反转录聚合酶链式反应、免疫组织化学及Western免疫印迹检测其转录、表达活性.结果:转染的兔骨髓间充质干细胞细胞可见绿色荧光蛋白的持续表达,绿色荧光蛋白分布于整个细胞.呈胞浆分布,说明重组载体构建成功并能在体细胞中表达.转染pIRES2-EGFP-BMP-2的兔骨髓间充质干细胞经G418抗性筛选并传代、培养4周后,RT-PCR反应可扩增出112 kb条带,大小与预期相符合.Western免疫印迹检测显示,经pIRES2-EGFP-BMP-2转染的兔骨髓间充质干细胞经在相对分子质量为30×103处显现单一特异性条带,表明为骨形成蛋白2基因表达产物.免疫组织化学显示,转染pIRES2-EGFP-BMP-2后经G418抗性筛选并传代、培养4周后的兔骨髓间充质干细胞细胞质中有棕黄色颗粒阳性信号.结论:用pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒成功转染兔骨髓间充质干细胞并获得表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白靖平		158	645	12.0	17.0
2	库热西·玉努斯	新疆医科大学基础医学院分子生物学教研室	73	217	9.0	11.0
3	詹玉林	新疆医科大擘第一附属医院骨科	16	104	6.0	9.0
4	黄国虹	新疆医科大学基础医学院分子生物学教研室	11	59	4.0	7.0