差异显示逆转录PCR鉴定约氏疟原虫红前期发育相关基因及其特征分析

• 作者: 何谐 吕扬 宋蓓 张锡林
• 来源期刊: 国际医学寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 疟原虫 约氏 差异显示逆转录聚合酶链反应 红前期 差异基因
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-9
• 页数: 6页
• 分类号: R5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4122.2009.01.002

摘要

目的 寻找约氏疟原虫红前期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能.方法分别提取约氏疟原虫感染人鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含昔高(＞70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用差异显示RT-PCR(differential display RT-PCR,DD-PCR)技术进行扩增,筛选筹异片段,经TA克隆后测序并进行序列分析. 结果获得6个约氏疟原虫红前期发育相关基因 PyHs4、PyHs5、PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9;其中PyHs4与约氏疟原虫乙酰葡糖胺磷酸变位酶(phosphoacetylglucosamine mutase,AGM,ID:PY02130)基因具有91%的柑似性,PyHs5与约氏疟原虫红细胞膜蛋白3(erythrocyte membrance prontein 3.PyEMP3,ID:PY05500)基因具有100% 的同源性,PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9经Blast序列分析为疟原虫基因,但功能未知.结论应用DD-PCR技术成功扩增了约氏疟原虫红前期发育相关基因,为进一步进行重组表达、功能及疫苗研究奠定了基础.