人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3, CYP3A4.4, CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性

• 作者: 曾苏 王晓雯
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞色素P450 CYP3A4 突变 杆状病毒科 睾酮
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 456-463
• 页数: 8页
• 分类号: R965.1
• 字数: 5581字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2009.06.007

摘要

目的 重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3, CYP3A4.4, CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源.方法 应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性.结果 在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3, CYP3A4*4, CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录.感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢.结论 应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3, CYP3A4.4, CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白, 其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾苏	浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室	162	1373	22.0	31.0
2	王晓雯	浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室	4	13	1.0	3.0