人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化

• 作者: 吴文言 彭宇 李海 黎晓天
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人趋化因子受体CCR5 重叠延伸拼接 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 39-42,47
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化.方法 分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N.端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(splicing byoverlapping extension,SOE)PCR实现两片段DNA的拼接后(命名为CCR5-N-E2)克隆人质粒pBlueScript M13中,同时构建原核表达载体pET-21b(+)-CCR5-N-E2,转入表达菌株BL21(DE3),IVIG诱导表达重组蛋白CCR5-N-E2,表达产物通过蛋白免疫印迹进行鉴定,并采用金属螯合层析法对重组表达产物进行纯化.结果 经测序,构建的重组原核表达载体与预期完全一致,相对分子质量为8 500的日的蛋白在BL21(DE3)菌株中得到高效表达,表达量约占总蛋白的50%,表达产物以包涵体形式存在.蛋白免疫印迹实验表明该重组蛋白与抗CCR5 N.端序列的单克隆抗体发生特异性结合.通过Ni2+亲和层析,目的 蛋白的纯度可达95%以上.结论 实现CCR5-N-E2编码序列的拼接、融合蛋白的表达以及纯化,为广泛筛选以CCR5为靶点的临床治疗药物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴文言		32	312	10.0	17.0
2	李海		19	39	3.0	6.0
3	彭宇		2	2	1.0	1.0
4	黎晓天		2	2	1.0	1.0