五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库的构建与鉴定

• 作者: 刘涛 成鹰 李治深 杜丽 林杰材 满初日嘎 王凤阳 申明霞 祁超
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 五指山小型猪 外周血白细胞 cDNA文库 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 222-226
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 4089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2009.03.016

摘要

目的 运用SMART 技术,构建了五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库.方法 用RNAiso reagent(TaKaRa)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜) 制备总RNA.用Powerscript TM 反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分离后,500 bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coli.DH5α,建成原始文库.然后,扩增文库并随机挑取单菌落,PCR鉴定重组子插入片段大小.结果 经鉴定,库容量达到1.5×106克隆,原始文库滴度为9.7×109 cfu/mL,扩增后的文库滴度为6.4 ×1010 cfu/mL.重组率接近100%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均长度约为1.1 kb.结论 构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库符合建库要求,可以用于全长cDNA 的筛选.为五指山小型猪新基因的获得及结构和功能研究提供了可靠材料.